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Documents/Lab_protocol에 해당되는 글 2건
- 2011.06.20 ITC 간단 가이드..
- 2011.05.12 합성된 peptide desaliting하는 방법
글
ITC 간단 가이드..
Documents/Lab_protocol
2011. 6. 20. 16:38
임시로 만든 매뉴얼;;;
너무 오랫동안 글을 올리지 않은 거 같길래 오랜만에....
ITC를 할 때 가장 큰 문제가 error가 크다는 점이므로,
DTT 사용 금지.
TRIS 사용 금지,
불순물 filter + centrifuge로 제거는 꼭 하는 편이 좋....지... 않을지;;;
Method_ITC_modified.pdf너무 오랫동안 글을 올리지 않은 거 같길래 오랜만에....
ITC를 할 때 가장 큰 문제가 error가 크다는 점이므로,
DTT 사용 금지.
TRIS 사용 금지,
불순물 filter + centrifuge로 제거는 꼭 하는 편이 좋....지... 않을지;;;
글
합성된 peptide desaliting하는 방법
Documents/Lab_protocol
2011. 5. 12. 18:21
0.
2kDa 이하의 peptide를 desalting할 때는 아래에 있는 방법을 쓰면 되고,
2kDa이상이면 그냥 mini-PD10등으로 하시길.
5kDa 크면 NAP5나 dialysis, GPC등으로..
Sephadex G-10, G-25, G-50등의 핸드북
http://is.gd/KRKqYJ
1.
원문은 여기
http://is.gd/iwb0Bl
그냥 한글로 보기 좋으라고 나름 번역만 함;
###############################################################
desalting peptide
1. 20~40mg의 peptide를 1~2ml 증류수에 녹인다.
참고사항 :
- crude peptide가 약 50% salt를 포함되어있다고 가정한 상황임.
- peptide가 물에 잘 녹지 않는 경우에는 pH를 낮춰본다.
- 내가 주문한 제품은 Sep-pak C18 Catridge : WAT020515 (Waters)
- HPLC grade 용매는 Merck나 Ficher제품을 사용하면 됨
2.
그냥 센돌이에서 하는 방법도 있음.
http://is.gd/vwIk6R
귀찮아서 찾아보진 않았지만, VIVA인 걸 보니, Pierce제품인듯 싶으니 좀만 찾아보면 나올듯;;
2kDa 이하의 peptide를 desalting할 때는 아래에 있는 방법을 쓰면 되고,
2kDa이상이면 그냥 mini-PD10등으로 하시길.
5kDa 크면 NAP5나 dialysis, GPC등으로..
Sephadex G-10, G-25, G-50등의 핸드북
http://is.gd/KRKqYJ
1.
원문은 여기
http://is.gd/iwb0Bl
그냥 한글로 보기 좋으라고 나름 번역만 함;
###############################################################
desalting peptide
1. 20~40mg의 peptide를 1~2ml 증류수에 녹인다.
- 녹지 않을 경우 1ul의 Triethylamine 이나 5% HOAc를 넣어 pH를 낮춘다.
- 저장할 경우 10ul씩 aliquot하여 -20C에 보관한다.
2. Sep-Pak plus C-18 카트리지(Waters나 milipore)를 준비한다.
- 10ml HPLC grade acetonitrile로 씻어준다. (활성화를 위해)
-10ml 증류수로 씻어준다. (acetonitrile 제거를 위해)
-빈 공기로 모든 증류수를 비워낸다.
3. 작은 용량의 (3ml 정도?) 주사기를 이용하여 peptide를 로딩한다.
-peptide는 두번 loading한다. (즉, flowthrough를 한 번 더 로딩한다)
-두번 지나친 flowthrough는 버리지 말고 따로 보관한다.
-loading 할 때는 천천히 (dropwise) 일정한 속도로 한다.
-loading이 끝났으면 10ml 증류수로 씻어준다.
-빈 공기로 모든 증류수를 비워낸다.
4. peptide를 4ml으로 70% methanol 용액으로 elution한다.
-methanol은 HPLC grade임.
-70% methanol 용액 조성 : 7ml MeOH + 3ml DDW + 3.5ul 2-mercaptoethanol
-fraction은 0.5ml씩 8개 튜브에 담는다.
-수율(yield)를 알 때까지 카트리지는 버리지 않는다.
5. 모든 fraction을 speed vac 이나 Freeze dry (lyophilization) 한다.
-무게나 UV정량을 통해 수율을 계산한다.
-desalting 된 peptide는 -20C에서 보관한다.
참고사항 :
- crude peptide가 약 50% salt를 포함되어있다고 가정한 상황임.
- peptide가 물에 잘 녹지 않는 경우에는 pH를 낮춰본다.
- 내가 주문한 제품은 Sep-pak C18 Catridge : WAT020515 (Waters)
- HPLC grade 용매는 Merck나 Ficher제품을 사용하면 됨
2.
그냥 센돌이에서 하는 방법도 있음.
http://is.gd/vwIk6R
귀찮아서 찾아보진 않았지만, VIVA인 걸 보니, Pierce제품인듯 싶으니 좀만 찾아보면 나올듯;;
